III lncRNA cDNA Synthesis Kit反轉錄
Script III lncRNA cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）采用第三代高效逆轉錄酶，具有更強的延伸能力和穩(wěn)定性，并配備了具有DNA分解活性的特殊dsDNase，只需一步操作， 即可同時完成基因組清除與逆轉錄反應，操作方便快捷。逆轉錄產物可以用于PCR，克隆基因III lncRNA cDNA Synthesis Kit反轉錄
Script III lncRNAcDNA Synthesis Kit（With dsDNase）
lncRNAcDNA 第一鏈合成試劑盒（去基因組）
III lncRNA cDNA Synthesis Kit反轉錄
目錄號:71500
產品內容
Components | 71500-50 25 rxns (20 μl/rxn) | 71500-100 100 rxns (20 μl/rxn) |
5x TRUE Reaction Mix | 100 μl | 400 μl |
dsDNase | 25 μl | 100 μl |
lncRNA-RT primer | 25 μl | 100 μl |
RNase free H2O | 1 ml | 1.5 ml |
保存條件：-20℃保存，有效期 12 個月。
產品簡介
Script III lncRNA cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）采用第三代高效逆轉錄酶，具有更強的延伸能力和穩(wěn)定性，并配備了具有DNA分解活性的特殊dsDNase，只需一步操作， 即可同時完成基因組清除與逆轉錄反應，操作方便快捷。逆轉錄產物可以用于PCR，克隆基因；也可以用于qPCR，兼容染料法和探針法，用來檢測高拷貝或低拷貝基因。
lncRNA cDNA 第一鏈合成試劑盒是專門針對長鏈非編碼RNA（lncRNA）反轉錄而開發(fā)的產品。與 mRNA 相比，lncRNA具有豐度低、GC 含量差異大、二級結構更復雜等特性，傳統(tǒng)反轉錄試劑lncRNA 難以達到理想的效果。本試劑盒含有高效去除基因組 DNA 的 dsDNase，可有效避免殘留的基因組DNA 對后續(xù)檢測結果的干擾。本試劑盒中中使用的反轉錄酶是通過分子改造后的新型反轉錄酶，具有更強的 RNA 親和性和熱穩(wěn)定性，使本試劑盒在通讀 GC 含量高，二級結構復雜，低豐度的 RNA 模板和抗逆性等方面表現(xiàn)突出，特別適合表達水平相對較低，二級結構相對復雜的 lncRNA 的反轉錄反應。
操作步驟：第一連cDNA合成 (以20 μl反應體系為例)
1．反應體系的配制
使用 RNase-Free PCR 管在冰上配制：(使用前，請將各組分輕彈混勻，點甩離心收集至管底，置冰上備用。)
Components | Volume |
Total RNA/mRNA | 50 ng - 5 μg / 5 ng -500 ng |
lncRNA-RT primer | 1 μl |
5x TRUE Reaction Mix | 4 μl |
dsDNase | 1 μl |
RNase free H2O | To 20 μl |
2．輕柔吸打混勻，點甩離心，置 PCR 儀進行逆轉錄反應。
25℃孵育 10 min 后，產物用于 PCR，42℃孵育 30 min；產物用于 qPCR，42℃孵育 15 min。
注意：如果模板具有復雜二級結構或高 GC 區(qū)域，可以先只加 RNA 模板、引物和 RNase free H2O，混勻，65℃變性 5 min，冰上冷卻，點甩離心后加入其它成分，將 42℃孵育溫度提升至 50°C，有助于提高產量。
3． 85°C加熱 5 sec，失活RTase和dsDNase，終止反應。
逆轉錄產物可立即用于PCR或qPCR反應，或保存于-20°C，并在半年內使用；長期存放建議分裝后在-70°C保存，cDNA應避免反復凍融。
PCR（建議取2 - 4 μl的cDNA產物原液作為PCR模板。）
1. 常規(guī)擴增： 71800-2x Lightning Taq PCR MasterMix (10sec/kb)
2. 高保真擴增：71814-2×LongHiFi PCR MasterMix (≤10kb，15sec/k)
qPCR（建議取1~2μl cDNA產物原液作為20μl qPCR反應體系的模板。如果基因表達量較高，可以根據(jù)實際情況適當稀釋cDNA模板后使用。）
III lncRNA cDNA Synthesis Kit反轉錄
